【小配方】2、電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液配制方法

日期時間：2016-01-30     文章來源：本站     點擊量：2349

1、10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide）：

    小心稱取1g溴化乙錠，轉移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到溶解，分裝成小份4℃避光保存。

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2、電泳緩沖液

50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水	242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補足1L

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3、5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水	54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補足1L

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4、6×DNA Loading buffer蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖 水	1.5ml 1％溴酚藍 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 補足到10ml

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5、10×DNA Loading buffer(終止反應)十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚藍 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油 水	20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 補足到10ml

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6、30％（W/V）Acrylamide

組份濃度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％
配制量 1L
配置方法 ：

1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中

Acrylamide         290g

BIS                10g
2.向燒杯中加入約600mL的去離子水，充分攪拌溶解
3.加入去離子水將溶液定容至1L，用0.45μm濾膜濾去雜質。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀銑胺具有很強的神經毒性，并可通過皮膚吸收，其作用有積累性，配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，因為有可能含有少量的未聚合成份。

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7、40％（W/V）Acrylamide

組份濃度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％
配制量 1L
配置方法

1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中
Acrylamide     380g
BIS            20g
2.向燒杯中加入約600mL的去離子水，充分攪拌溶解
3.加入去離子水將溶液定容至1L，用0.45μm濾膜濾去雜質。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀銑胺具有很強的神經毒性，并可通過皮膚吸收， 其作用有積累性，配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無 毒，但也應謹慎操作，因為有可能含有少量的未聚合成份。

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8、10％（W/V）過硫酸銨

組份濃度 10％（W/V）過硫酸銨 
配制量      10mL 
配置方法

1.稱取1g過硫酸銨。 
2.加入10mL的去離子水后攪拌溶解。 
3.貯存于4℃。 
注意：10％過硫酸胺溶液在4℃保存時間可使用2周左右， 超過期限會失去催化作用。

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9、考馬斯亮藍R-250染色液

組份濃度 0.1％（W/V）考馬斯亮藍R-250，25%（V/V）異丙醇， 10％（V/V）冰醋酸 
配制量      1L 
配置方法

1.稱取1g考馬斯亮藍R-250,置于1L燒杯中。 
2.量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。
3.加入100mL的冰乙醋酸，均勻攪拌。 
4.加入650mL的去離子水，均勻攪拌。 
5.用濾紙出去顆粒物質后，室溫保存。

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10、考馬斯亮藍染色脫色液

組份濃度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇 
配制量 1L 
配置方法

1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。 
醋酸     100mL 
乙醇     50mL 
dH2O     850mL 
2.充分混合后使用。

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11、顯影液

組份濃度 0.005％（V/V）檸檬酸，0.02％（V/V）甲醛(SDS-PAGE銀氨染色用)          

配制量 1L 
配置方法

1.稱取下列試劑，置于1L試劑瓶中。 
檸檬酸 50mg 
甲醛 0.2mL 
2.加入1L去離子水后，搖動混合后溶解。 
3.室溫保存。

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12、5×Tris-GlycineBuffer           

組份濃度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS 
（SDS-PAGE電泳緩沖液）       

配制量       1L 
配置方法

1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 
Tris           15.1g 
Glycine        94g 
SDS            5.0g 
2.加入約800mL的去離子水，攪拌溶解。 
3.加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。