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          【小配方】2、電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液配制方法

          日期時間:2016-01-30     文章來源:本站     點擊量:2349


          1、10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide):

              小心稱取1g溴化乙錠,轉移到廣口瓶中,加100ml水,用磁力攪拌器攪拌直到溶解,分裝成小份4℃避光保存。



          2、電泳緩沖液

          50×Tris-乙酸(TAE)緩沖液

          成分及終濃度

          配制1L溶液各成分的用量

          2mol/L Tris
          1mol/L
          乙酸
          100 mmol/L EDTA

          242g
          57.1 ml
          的冰乙酸(17.4 mol/L
          200ml
          0.5 mol/L EDTApH 8.0
          補足1L





          3、5×Tris-硼酸(TBE)緩沖液

          成分及終濃度

          配制1L溶液各成分的用量

          445 mmol/L Tris
          445 mmol/L
          硼酸鹽
          10 mmol/L EDTA

          54g
          27.5g
          硼酸
          20 ml
          0.5 mol/L EDTApH 8.0
          補足1L





          4、6×DNA Loading buffer蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

          成分及終濃度

          配制10ml溶液各成分用量

          0.15%溴酚藍
          0.15
          %二甲苯青FF
          5 mmol/L EDTA
          40
          %聚蔗糖

          1.5ml 1%溴酚藍
          1.5ml 1
          %二甲苯青FF
          100ul 0.5mol/L EDTA
          pH8.0
          4g
          補足到10ml



          5、10×DNA Loading buffer(終止反應)十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)

          成分及終濃度

          配制10ml溶液各成分用量

          0.2%溴酚藍
          0.2
          %二甲苯青FF
          200 mmol/L EDTA
          0.1
          SDS
          50
          %甘油

          20mg
          20mg
          4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
          100ul 10
          SDS
          5ml
          補足到10ml



          6、30%(W/VAcrylamide

          組份濃度 30%(W/VAcrylamide 0.05
          配制量 1L
          配置方法 :

          1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中

          Acrylamide         290g

          BIS                10g
          2.向燒杯中加入約600mL的去離子水,充分攪拌溶解
          3.
          加入去離子水將溶液定容至1L,用0.45μm濾膜濾去雜質。
          4.
          于棕色瓶中4℃保存。
          注意:丙稀銑胺具有很強的神經毒性,并可通過皮膚吸收,其作用有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成份。



          7、40%(W/VAcrylamide

          組份濃度 40%(W/VAcrylamide 0.05
          配制量 1L
          配置方法

          1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中
          Acrylamide     380g
          BIS            20g
          2.
          向燒杯中加入約600mL的去離子水,充分攪拌溶解
          3.
          加入去離子水將溶液定容至1L,用0.45μm濾膜濾去雜質。
          4.
          于棕色瓶中4℃保存。
          注意:丙稀銑胺具有很強的神經毒性,并可通過皮膚吸收, 其作用有積累性,配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無 毒,但也應謹慎操作,因為有可能含有少量的未聚合成份。



          8、10%(W/V)過硫酸銨

          組份濃度 10%(W/V)過硫酸銨 
          配制量      10mL 
          配置方法

          1.稱取1g過硫酸銨。 
          2.加入10mL的去離子水后攪拌溶解。 
          3.貯存于4℃。 
          注意:10%過硫酸胺溶液在4℃保存時間可使用2周左右, 超過期限會失去催化作用。



          9、考馬斯亮藍R-250染色液

          組份濃度 0.1%(W/V)考馬斯亮藍R-250,25%(V/V)異丙醇, 10%(V/V)冰醋酸 
          配制量      1L 
          配置方法

          1.稱取1g考馬斯亮藍R-250,置于1L燒杯中。 
          2.量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中,攪拌溶解。
          3.加入100mL的冰乙醋酸,均勻攪拌。 
          4.加入650mL的去離子水,均勻攪拌。 
          5.用濾紙出去顆粒物質后,室溫保存。



          10、考馬斯亮藍染色脫色液

          組份濃度 10%(V/V)醋酸,5%(V/V)乙醇 
          配制量 1L 
          配置方法

          1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。 
          醋酸     100mL 
          乙醇     50mL 
          dH2O     850mL 
          2.充分混合后使用。



          11、顯影液

          組份濃度 0.005%(V/V)檸檬酸,0.02%(V/V)甲醛(SDS-PAGE銀氨染色用)          

          配制量 1L 
          配置方法

          1.稱取下列試劑,置于1L試劑瓶中。 
          檸檬酸 50mg 
          甲醛 0.2mL 
          2.加入1L去離子水后,搖動混合后溶解。 
          3.室溫保存。




          12、5×Tris-GlycineBuffer           

          組份濃度 0.125M Tris,1.25M Glycine,0.5%(w/v)SDS 
          (SDS-PAGE電泳緩沖液)       

          配制量       1L 
          配置方法

          1.稱取下列試劑,置于1L燒杯中。 
          Tris           15.1g 
          Glycine        94g 
          SDS            5.0g 
          2.加入約800mL的去離子水,攪拌溶解。 
          3.加去離子水將溶液定容至1L后,室溫保存。





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