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          【小配方】1、分子生物學常用貯液與溶液

          日期時間:2016-01-30     文章來源:本站     點擊量:2407



          1、1mol/L亞精胺(Spermidine:

          溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。



          2、1mol/L精胺(Spermine):

          溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。



          3、10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):

          77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。




          4、10mg/ml牛血清蛋白(BSA):

          100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學試劑級,無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動,直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。



          5、8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):

          溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。




          6、3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):

          溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調溶液的pH5.2,再加水定容到100ml。



          7、0.5mol/L EDTA:

          配制等摩爾的Na2EDTANaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽?;蚍Q取186.1gNa2EDTA·2H2O20gNaOH,并溶于水中,定容至1L。




          8、1mol/L HCl

          8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。



          9、25mg/ml IPTG

          溶解250mgIPTG(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。




          10、100mmol/L PMSF
          溶解174mgPMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹
          或貯存于-20℃。



          11、20mg/ml蛋白酶Kproteinase K):

          200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。





          12、10mg/ml Rnase A(無DNase):

          溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/LTrisHCl調pH7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)



          13、10N氫氧化鈉(NaOH):

          溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。



          14、100%三氯乙酸(TCA:

          在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。(稀釋液應在臨用前配制)



          15、2.5 Xgal5--4--3-吲哚-β-半乳糖苷):

          溶解25mgXgal1ml的二甲基甲酰胺(DMF,用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。




          16、10SDS(十二烷基硫酸鈉):

          稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。



          17、2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):

          溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。



          18、DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水:

          100ul DEPC  100ml 水中,使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應,不可用DEPC處理Tris緩沖液。


          19、甲酰胺(deionized formamide):

          直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮氣于-80℃貯存(防止氧化)。



          20、苯酚/氯仿/異戊醇:

          Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(241)均勻混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。



          21、PBS Buffer

          組份:137 mM NaCl,2.7mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4

          配置方法(1L):

          1. 稱量下列試劑,置于1L燒杯中。
          NaCl                8 g 
          KCl                0.2g 
          Na2HPO4          1.42 g 

          KH2PO4            0.27g

          2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水,充分攪拌溶解。

          3. 滴加HClpH值調節至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1L。

          4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
          注意:上述PBS Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1mM CaCl20.5 mM MgCl2。



          22、磷酸緩沖液(phosphate buffer):
          按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)貯液:溶解138g于足量水中,使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

          1mol/L 磷酸二氫鈉(ml

          1mol/L 磷酸氫二鈉(ml

          最終pH

          77
          850
          815
          775
          735
          685
          625
          565
          510
          450
          390
          330
          280

          123
          150
          185
          225
          265
          315
          375
          435
          490
          550
          610
          670
          720

          6.0
          6.1
          6.2
          6.3
          6.4
          6.5
          6.6
          6.7
          6.8
          6.9
          7.0
          7.1
          7.2




          23、Tris緩沖液(Tris-HCl buffer):

          121gTris堿溶解于約0.9L水中,再根據所要求的pH25下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調整終體積至1L。

          濃鹽酸的體積(ml

          pH

          8.6
          14
          21
          28.5
          38
          46
          56
          66
          71.3
          76

          9.0
          8.8
          8.6
          8.4
          8.2
          8.0
          7.8
          7.6
          7.4
          7.2



          24、TE(用于溶解和貯存DNA

          成分及終濃度

          配制100ml溶液各成分的用量

          10mmol/L TrisHCl
          1mmol/L EDTA

          1ml 1mol/L Tris-HClpH7.4-8.0,25
          200ul 0.5 mol/L EDTA
          pH 8.0
          98.8ml





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